발효 공정을 통한 아로니아 추출물의 항염증 효능 증진

1. 시료 제조

시료 제조에 사용 된 아로니아는 2013년도 산 단양군에서 채취한 아로니아를 사용하였다. 아로니아 시료의 추출은 열수, 에탄올, 발효 추출 3가지 추출방법으로 각각 수직 환류냉각기 가 설치되어있는 둥근바닥 플라스크를 사용하여 수행하였다. 열수추출물은 1ℓ의 증류수에 아로니아 열매 100 g을 사용하 여 100℃의 조건에서 24시간 추출하였고, 에탄올 추출물 또한 동일한 조건에서 용매를 70% 에탄올로 하여 80℃에서 24시 간 추출하였다. 발효 추출물의 경우 아로니아 100 g을 유산균 Lactobacillus rhamnosus에 7일 동안 37℃, 90 rpm에서 배양 하였으며, 배양한 뒤 상기와 마찬가지로 70% 에탄올 추출 후 아로니아 추출액을 감압여과기를 사용하여 여과하였다. 여과 후에 회전식 감압농축기 (EYELA N-1000, Tokyo Rikakikai Co., Tokyo, Japan)로 농축한 후, 동결건조기 (PVTFA 10AT, ILSHINBioBase, Dongducheon, Korea)에 72시간동안 동결건 조하여 분말로 만들어 실험을 진행하였다.

2. 세포 및 시약

쥐의 대식세포인 RAW 264.7과 Jurkat T 세포, HDF (Human dermal fibroblasts) 세포는 한국세포주은행 (KCLB, Seoul, Korea)에서 동결 된 것으로 구입하였다. 구입한 세포는 DMEM (Gibco, Carlsbad, CA, USA)배지에 10% fetal bovine serum (Gibco, Carlsbad, CA, USA)을 첨가하여 37℃, 5% CO₂ 조건하에서 배양하였다. 그 밖에 사용 된 모든 시약 들은 Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, USA)을 통하여 구입, 사용하였다.

3. 환원력 측정

환원력 측정은 Oyaizu 방법 (1986)을 참고하였다. 0.25㎖의 아로니아 시료 추출물과 0.2 M의 sodium phosphate buffer와 1%만큼의 potassium ferricyanide 0.25㎖을 함께 첨가하여 50℃ 조건에서 20분 간 반응시킨 후 10% trichloroacetic acid 0.25㎖을 첨가하여 반응을 종료시키고 4,000 rpm에서 10분 동 안 원심분리하였다. 원심분리 한 상등액 500㎕에 증류수 500 ㎕를 혼합하고 0.1%의 ferric chloride 용액 100 ㎕만 큼 넣어 상온에서 10분 동안 반응한 뒤 mircro plate reader (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA)로 700㎚에 서 흡광도를 측정하였다.

4. 세포 독성평가

세포독성평가는 MTT (3-(4,5-dimethythiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide, Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA) 시 약을 사용하여 실험을 진행하였다. 독성평가에는 HDF세포인 CCD-986sk를 사용하였으며, 7.5 × 10⁵ cells/well 만큼의 세포를 96-well plate에 주입한 후 하루 동안 배양하였다. 하루 뒤 배지 를 제거하고 알맞은 농도로 아로니아 시료를 총 200㎕만큼 투여하고 CO₂ 배양기에서 다시 한 번 24시간 동안 배양한다. 24시간 후 처리한 시료를 제거하고, MTT 용액을 200㎍/㎖의 농도로 하여 96-well plte에 첨가하고 빛을 차단한 채 37℃에 서 3시간 배양한다. 3시간 뒤 PBS buffer로 세척한 뒤 DMSO 를 각 well에 200㎕ 만큼 주입하고 20분 후 microplate reader로 570㎚의 파장에서 흡광도를 측정하였다.

5. NO (Nitric Oxide)생성량 측정

Nitric Oxide 생성량 측정은 RAW 264.7 세포를 사용하였다. 세포를 1.2 × 10⁶ cells/㎖ 만큼 96-well plate에 주입한 뒤 24시 간 배양하였다. 24시간 후 아로니아 추출물 시료를 0.5㎎/㎖의 농도로 처리한 뒤 추가로 시료에 LPS (Lipopolysaccharide)를 처리하여 각 well에 200㎕가 되도록 하고, 시료에 LPS를 처 리한 군과 처리하지 않은 군을 나누어 샘플처리 한 뒤 24시 간 동안 다시 배양하였다. 24시간 뒤 샘플의 상층액 50㎕를 취하여 새로운 96-well plate에 옮기고 난 뒤 Griess 시약 50㎕를 첨가하고 15분 간 반응하였다. 15분 후 microplate reader를 이용하여 540㎚에서 흡광도를 측정하였다. 정량은 standard인 NaNO₂를 사용한 standard curve를 통하여 NO생 성량을 정량하였다.

6. 사이토카인 생성 확인

Cytokine 생성량은 IL-6 (Interleukin-6), TNF-α (Tumor necrosis factor-alpha)의 정량 kit를 통하여 측정하였다. IL-6 는 Quantikine ELISA Mouse IL-6 kit (R&D Systems, Minneapolis, MN, USA)를 사용하였다. Jurkat T 세포 5.3 × 10⁵ cells/㎖만큼의 농도를 96-well plate에 넣어 24시간 배양한 후 샘플을 농도별로 처리하고 0.2 g/㎖농도로 맞춘 LPS (Lipopolysaccharide)를 모든 샘플에 같은 양으로 처리한 뒤 24시간 동안 다시 배양하였다. 24시간 뒤 kit의 실험 방법 에 맞춰 우선 assay diluent 50㎕를 넣고 적절히 준 뒤, 샘 플과 정량하기 위한 standard를 넣고 1분동안 충분히 섞어준 뒤 2시간 동안 실온에 두었다. 2시간이 지난 후에 wash buffer로 세척한 뒤 IL-6 conjugate를 넣고 2시간 동안 실온에 방치하였다. 그 뒤 wash buffer로 씻은 후 substrate solution 100㎕를 모든 시료군에 넣고 다시 30분 간 빛을 차단한 채 실온에 방치하였다. 30분 뒤 반응을 멈추기 위해 stop solution 을 넣고 microplate reader를 이용하여 450㎚ 파장에서 흡광 도를 측정하였으며, 정량은 standard를 이용하여 정량하였다.

TNF-α 역시 kit 실험 전까지 IL-6와 동일한 샘플처리를 한 후 동일한 회사의 kit인 Quantikine ELISA Mouse TNF-α kit (R&D Systems, Minneapolis, MN, USA)를 사용하여 TNF-α의 양을 확인하였다. 50㎕의 assay diluent를 준비 된 plate에 넣은 뒤 standard와 샘플 50㎕만큼 첨가하고 2시간 동안 실온에 두었다. 2시간 뒤에 wash buffer로 세척하고 TNF-α conjugate 100㎕를 첨가하고 2시간 동안 실온에 방치 하였다. 2시간 뒤 그 전과 마찬가지로 wash buffer로 세척해주 고 substrate solution 100㎕를 넣은 후 빛을 차단하여 30분 동안 실온에 두었다. IL-6와 같이 마지막으로 stop solution 100㎕를 첨가하여 반응을 멈추고 microplate reader를 이용하 여 450 ,㎚에서 흡광도를 측정하고, standard 곡선을 이용하여 각 샘플에 대한 TNF-α의 양을 정량 하였다.

7. PGE₂ 생성확인

PGE₂ (Prostaglandin E₂)생성량의 확인은 정량 가능한 kit를 이용하였다. 실험에는 Prostaglandin E₂ Assay Parameter kit (R&D Systems, Minneapolis, MN, USA)를 정량 하였다. 필 요한 아로니아 샘플과 standard를 150㎕ 만큼 농도별로 주입 한 뒤 각 well에 50㎕ 만큼의 primary antibody solution을 주입하고 1시간 동안 microplate shaker를 이용하여 500 rpm 의 속도로 실온에 방치하였다. 1시간이 지난 후 샘플 및 standard에 50㎕의 PGE₂ conjugate 를 첨가 한 뒤 다시 2시 간 동안 실온에 두었다. 그 후에 wash buffer를 이용하여 4회 세척 후 substrate solution을 각 well에 200㎕씩 첨가하고 30분간 빛을 차단한 채로 방치 하였다. 30분 후에 100㎕의 stop solution을 넣고 450㎚에서 흡광도를 측정하고 측정 된 흡광값에서 standard 곡선 그래프를 통해 샘플의 PGE₂의 양을 정량하였다.

8. HPLC 측정

아로니아의 열수 추출물, 70%에탄올 추출물, 발효시킨 열수 추출물 그리고 발효 70% 에탄올 추출물로 HPLC 측정을 실 시하였으며, 샘플은 1000 ppm의 농도로 하였고 standard 안토 시아닌 (cyanidin-3-galactoside, chromadex, Irvine, CA, USA)은 100 ppm 으로 분석하여 비교하였다. 조건은 아로니아 의 안토시아닌함량에 대한 연구에서 참고하였다 (Marie B et al., 2013). 고성능 액체크로마토그래피 (Aglient 1260 series, Aglient, Santa Clara, CA, USA)를 사용하였으며, 칼럼은 Jupiter 5u C18 3000A (150 × 4.6㎜)을 사용하였다. 이동상은 (A)HCOOH-H₂O (1 : 9), (B)HCOOH-MeOH-H₂O (1 : 5 : 4) 의 비율로 하여 (A) 100%에서 시간은 0 ~ 2분, (A) 30%, (B) 70%에서 220분 구간, (B) 100%에서 20 ~ 22분 구간 그 리고 (A) 100%에서 22 ~ 24분 구간을 측정하였다. 모든 시료 는 0.45㎛ 필터링을 하였으며 모든 구간에서 유속은 0.8㎖/ min하고, 칼럼의 온도는 30℃로 유지하였다. HPLC의 크로마 토그램은 520㎚의 파장에서 측정하여 비교분석하였다.

9. 통계처리

모든 실험의 데이터 통계처리는 3회 반복하였으며, 실험값 의 통계는 SPSS 프로그램을 통하여 Duncan’s Multiple Range Test (DMRT) 방법으로 처리하였다. 처리구간의 최소 유의 수준의 차는 p < 0.05로 처리 하였다.

1. 환원력 측정

아로니아 추출물의 항산화 효능을 평가하기 위하여 샘플의 농도 별로 측정하였으며, Fig. 1에 그 결과를 확인하였다. 항 산화능이 높을수록 색은 진하며 흡광값은 높게 나타난다. 단 일물질인 cyanidin-galactoside (cya-gal)의 경우 0.02㎎/㎖의 농도로 진행하였으며, 아로니아 1 g당 20㎎의 안토시아닌이 함량 되어있다고 보고한 선행 연구를 참고하여 1.0㎎/㎖ 농도 의 추출물과 비교하기 위하여 농도를 설정하였다 (Jan and Aneta, 2005). 아로니아 시료와 대표적인 항산화물질인 ascorbic acid을 비교하였을 때, ascorbic acid는 0.2㎎/㎖의 농도에서 1.054에 해당하는 흡광값이 측정되었다. Cya-gal의 흡광값은 0.469로 0.2㎎/㎖ 농도의 ascorbic acid보다 농도는 10배 낮 지만 절반에 가까운 흡광값으로 보아 단일물질의 환원력을 확 인할 수 있다. 이에 반해 아로니아 시료의 흡광값을 살펴보면 가장 높게 확인 된 흡광도가 1.0㎎/㎖의 농도에서 발효 아로 니아 70% 에탄올 추출물이 0.832로 측정 되었으며, 70% 에 탄올 추출물이 0.735의 흡광도를 보였다. 낮은 농도에서는 추 출방법별 샘플간의 유의적인 차이가 확인 되지 않았으나, 농 도가 증가할 수록 그 차이가 증가함을 확인하였다. 상기와 같 은 결과를 보면 일반적인 종래 추출법 중 에탄올 추출물의 항 산화 효능이 더 높게 측정 되었고, 이러한 에탄올 추출물에 유산균을 통한 발효를 실시함으로서 에탄올 추출물에 비해 더 욱 증진 된 항산화 효능을 확인하였으며, 발효 추출물의 환원 력은 같은 안토시아닌이 함유 된 복분자 연구에서의 환원력과 비교하였을 때 (Park et al., 2014), 항산화능이 훨씬 더 뛰어 난 것을 확인하였다. 2

Fig. 1.

Reducing power from the Aronia melanocarpa extracts obtained by different extraction process.Mean values ± SD from triplicate separated experiments are shown. Mean with difference letter (A-E) within same sample are significantly different at p < 0.05 (A-E; a-b). 1)EE: 70% Ethanol Extract. 2)FEE: 70% Ethanol Extract after lactic acid fermentation. *Concentration of cyanidin-3-galactoside: 0.02㎎/㎖.

Fig. 2.

Cell cytotoxicity from the Aronia melanocarpa extracts obtained by different extraction process.Mean values ± SD from triplicate separated experiments are shown. Mean with difference letter within same sample are significantly different at p < 0.05 (A-E; a-b). 1)EE: 70% Ethanol Extract. 2)FEE: 70% Ethanol Extract by fermentation process. *Concentration of cyanidin-3-galactoside: 0.02㎎/㎖.

2. MTT 세포 독성평가

피부면역에 대한 활성평가를 하기에 앞서, 아로니아 시료의 세포독성을 확인하기 위하여 MTT 용액을 이용한 세포 독성 을 측정하였다. 세포 독성평가의 결과로 cya-gal은 5.15%만큼 의 독성을 보였으며, 아로니아 시료 중 가장 독성이 높은 추 출물은 발효를 통한 70% 에탄올 추출물로 1.0㎎/㎖의 농도 에서 12.06%의 독성이 확인되었다. 뒤를 이어 70% 에탄올 추출물이 8.19%가 측정되었다.

발효한 에탄올 추출물이 일반 추출물보다 세포독성이 높긴 하나 이 값은 세포실험을 진행함에 있어 독성이 실험에 영향 을 끼칠 만큼 높지 않은 것으로 판단하였다. 기타 다른 향장 연구가 보고 된 더덕에 대한 선행연구와 비교하였을 때 20% 미만의 독성을 가지는 것으로 보아 (Kim et al., 2013), 발효 한 아로니아 시료 역시 세포에 대한 독성이 높지 않은 것을 확인할 수 있었다.

3. NO (Nitric Oxide)생성량 측정

NO 생성량을 측정함으로서 면역에 대한 효능을 확인해보고 자 하였다. 실험의 결과는 Fig. 3에 나타내었다. NO는 사이토 카인 및 LPS 같은 내독소에 의해 생성되며, 염증 유발로 인 하여 생성된 NO 생성량을 확인함으로서 아로니아 샘플의 항 염증의 효과를 알아보았다. 실험은 LPS 처리군과 무처리군으 로 나누어 진행하여 그 결과 값을 확인하였다. Cya-gal의 경 우 LPS 처리시 9.52 μM의 NO생성량으로 에탄올 추출물보다 는 높게 측정 되었다. 샘플은 LPS 처리군과 무 처리군 두 가 지군 모두 발효 70% 에탄올 추출물의 NO생성량이 가장 낮게 측정 되었다. LPS 처리군의 경우 7.24 μM의 NO 생성량이 측정되었다. 상기와 같은 결과 값은 면역효능이 있다고 보고 된 지치의 논문에서 같은 조건하에 NO생성량이 10.5 μM인 것을 확인하였을 때 (Seo et al., 2013), 적은 생성량으로 보 아 유산균을 통하여 발효 된 아로니아 시료는 NO생성억제에 대한 효능이 있음을 확인할 수 있었다. 또한 유산균을 통한 발효를 실시함으로서 기존의 추출물 보다 NO 생성에 대한 억 제능이 증진 된 것을 알 수 있다.

Fig. 3.

Estimation of nitric oxide production in the macrophages by adding the Aronia melanocarpa extracts obtained through three different extraction processes.Mean values ± SD from triplicate separated experiments are shown. Mean with difference letter within sample are significantly different at p < 0.05 (A-B; a-b). 1)EE: 70% Ethanol Extract. 2)FEE: 70% Ethanol Extract by fermentation process.

4. PGE₂ 생성량 확인

염증 생성에 주 원인이 되는 PGE₂ 생성량을 확인함으로서 아 로니아의 염증억제에 대한 효능을 확인해 보고자 실시하였다. 그 결과는 Fig. 4에 나타내었다. 단일물질인 cya-gal은 0.02㎎/㎖의 농도에서 대부분의 아로니아 시료 0.5 ~ 0.75㎎/㎖ 농도의 PGE₂ 생성량을 보였으며, 모든 샘플에 대하여 농도에 따라 PGE₂의 생성량이 감소하는 것을 확인할 수 있다. NO생 성과 마찬가지로 발효를 실시하였을 때 그 생성량이 점차 낮 아지는 것을 알 수 있었다. 0.25 ~ 0.75㎎/㎖의 농도에서는 에 탄올 추출물과 발효 에탄올 추출물의 생성량이 유의적인 차이 를 나타내지 않았으나, 가장 높은 1.0㎎/㎖의 농도에서 발효 시킨 에탄올 추출물의 PGE₂ 생성량이 다른 추출물과 비교하 여 확연하게 낮은 생성량을 나타내었다. 발효 에탄올 추출물 에서 가장 낮게 측정된 PGE₂생성량은 152 pg/㎖ 로 측정 되 었고 이 값은 같은 발효를 통한 황금 추출물에 대한 항염증 연구에서 측정 되었던 PGE₂생성량 392 pg/㎖과 비교하여 (Choi et al., 2013), 상당히 낮은 값을 확인하였고 이와 같은 PGE₂의 생성량을 확인함으로서 항염증에 대한 효능 역시 뛰 어나며 발효 공정을 실시하였을 때 그 값이 증진 됨을 확인 하였다.

Fig. 4.

Variation of PGE2 production from the Aronia melanocarpa extracts through different extraction process.Mean values ± SD from triplicate separated experiments are shown. Mean with difference letter within same sample are significantly different at p < 0.05 (A-D; a-b). 1)EE: 70% Ethanol Extract. 2)FEE: 70% Ethanol Extract by fermentation process. *Concentration of cyanidin-3-galactoside: 0.02㎎/㎖.

5. Cytokine 생성 확인

PGE₂의 생성량을 확인한데 이어, PGE₂가 촉진하는 사이토카 인 중 IL-6 (Interleukin-6)의 생성량을 Fig. 5에 나타내었다. IL-6의 생성량은 발효 전보다 발효 후에 IL-6의 생성량이 저 감되는 것을 확인할 수 있었으며 발효한 70% 에탄올 추출물 에서 가장 낮은 IL-6의 생성량을 확인 할 수 있었다. 단일물 질인 cya-gal은 에탄올 추출물보다는 다소 높은 생성량을 나 타내었다. 아로니아 시료는 에탄올 추출물을 이용하여 발효를 실시하였을 때, 발효 70% 에탄올 추출물은 3.5 pg/㎖의 생성 량을 보여 아로니아를 발효 함으로서 IL-6생성량이 저감되어 항염증에 대한 효과를 향상시킬 수 있는 것을 확인하였다. TNF-α 생성량 역시 확인하여 Table 2에 나타내었다. 역시 IL-6와 마찬가지로 에탄올 추출물을 발효하여 TNF-α의 생성 저해 정도를 확인하였을 때, 발효 70% 에탄올 추출물이 865.5 pg/㎖의 생성량을 보여 일반 에탄올 추출물보다 낮은 생 성량이 확인되었으며, 이를 통해 발효공정을 실시함으로서 염 증을 억제하는 효능이 증진 된 것을 확인 하였다. 두 사이토 카인에 대하여 에탄올 추출물의 사이토카인 억제활성이 뛰어 났으며, 더 좋은 효능을 보인 에탄올 추출물을 이용하여 유산 균 발효를 실시하였을 때, 그 효과가 더욱 증진된 것을 확인 하였다.

Fig. 5.

Comparison of IL-6 production from Jurkat T cell by adding the Aronia melanocarpa extracts through different extraction process.Mean values ± SD from triplicate separated experiments are shown. Mean with difference letter within same sample are significantly different at p < 0.05 (A-C; a-b). 1)EE: 70% Ethanol Extract. 2)FEE: 70% Ethanol Extract by fermentation process. *Concentration of cyanidin-3-galactoside: 0.02㎎/㎖.

Table 2.

The production of TNF-α from the Aronia melanocarpa extracts from different extraction processes.

6. HPLC 측정을 통한 안토시아닌 함량 비교

상기와 같은 활성 실험 결과에서 유산균 발효를 통한 아로 니아 추출물의 효능이 왜 좋은가에 대한 설명 및 입증하기 위 하여 아로니아의 지표물질 함량에 대한 일반 추출법과 발효 추출의 상관관계를 알아보고자 하였다. 아로니아 시료와 아로 니아에 함유 되어있다고 알려진 cya-gal을 standard로 하여 HPLC 분석을 하고 (Marie et al., 2013), 그에 대한 결과를 Fig. 6와 Table 1에 나타내었다. 그 결과 일반적인 추출법 중 아로니아 열수 추출물에 비해 70% 에탄올 추출물의 cya-gal 의 함량이 14배 높게 나온 것을 확인할 수 있었다. 이와 같은 결과는 안토시아닌의 열에 대한 변성 및 파괴에 대한 선행 연 구를 참고하여 (Choung et al., 2008; Oren-shamir and Levi-nissim, 1997), 보다 높은 온도에서 추출한 열수추출물의 경우 안토시아닌의 한 종류인 standard 물질의 파괴 및 변성 으로 인하여 수용성인 안토시아닌이라 하더라도 그 함량이 매 우 미미하게 관찰 된 것으로 확인되며, 70% 에탄올 추출물은 물과 에탄올이 같이 있을뿐더러 열수 추출물보다 저온에서 추 출하기 때문에 상대적으로 안토시아닌의 파괴 및 변성이 덜 일어났기 때문에 안토시아닌의 손실이 적어 standard의 함량 이 더 높은 것으로 사료된다. 열수 추출물보다는 에탄올 추출 물의 안토시아닌 함량이 더 많아 유산균을 통한 발효를 에탄 올 추출물로 실시함으로서 발효 추출물에 대한 안토시아닌의 함량을 확인하였다. Fig. 6의 (D)와 Table 1에서 타겟물질로 한 지표물질인 발효 에탄올 추출물의 안토시아닌 cya-gal의 함 량이 증가하는 것을 확인하였고, 그 외에 물질에 대한 피크를 살펴보면 일반 에탄올 추출물과 비교하였을 때 그 크기가 감 소하는 피크를 확인하였다. 이와 반대로 지표물질 안토시아닌 과 마찬가지로 증가하는 피크 또한 확인하였으며 16분 직 후 에서는 에탄올 추출물에서 볼 수 없었던 피크 또한 새롭게 나 타난 것을 확인할 수 있었다. Table 1에서 지표물질인 cya-gal 의 함량을 비교하면 발효한 에탄올 추출물은 기존의 에탄올 추출물보다 많은 4.58㎎/g의 함량이 관찰되었다. 발효를 통한 안토시아닌 함량의 증가에 관한 타 논문인 흑미에 관한 논문 을 보면, 발효 시에 안토시아닌의 함량이 증가한 것을 확인할 수 있다 (Kim et al., 2012). 또한, 안토시아닌의 함량 증가는 유산균 발효를 실시함으로서 낮아진 pH가 안토시아닌의 안정 성에 영향을 준 것으로 사료된다 (Hwang and Ki, 2013). 이 를 토대로 확인하였을 때 상기의 HPLC 결과에 대하여 발효 를 통하여 cya-gal의 함량이 증가하였으며, 증가 된 안토시아 닌의 함량은 앞서 진행한 항염증의 효능 결과에 영향을 미쳤 을 것으로 사료된다.

Fig. 6.

Comparison of HPLC chromatograms from Aronia melanocarpa extracts.1)WE: Water Extract.2)EE: 70% Ethanol Extract.3)FEE: 70% Ethanol Extract after lactic acid fermentation.

Table 1.

Comaprison of anthocyanin contents from the extracts of Aronia melanocarpa obtained by different extraction processes.

아로니아 추출물을 이용한 각 활성실험에서 발효 에탄올 추 출물의 항염증에 대한 활성이 두드러지게 나타난 것을 확인할 수 있었다. 실험결과에서 cya-gal만으로도 항염증에 대한 효능 을 확인하여 HPLC의 측정결과와 활성실험결과를 비교하면 추 출별 아로니아 시료의 cya-gal의 함량이 증가할 수록 항염증 에 대한 효능이 증진됨을 확인하였다. 아로니아를 발효함으로 서 항염증 효능이 증가하였으나, 사용한 유산균 lactobacillus rhamnosus 자체의 항염증에 대한 효과가 있어 (Lin et al., 2009; Donato et al., 2010), 이것에 대한 연구가 더욱 필요할 것을 보인다. 아로니아에 함유 된 안토시아닌 cya-gal을 기준 물질로 하여 추출법별 안토시아닌 함량을 측정하였을 때, 열 수 보다 에탄올 추출물의 함량이 높게 측정되었다. 이는 열에 따른 안토시아닌의 변성 및 파괴 그리고 함량에 대한 선행연 구를 확인하였을 때 열수 추출물의 고온으로 인한 안토시아닌 의 변성 및 파괴로 확인되며 (Choung et al., 2008; Orenshamir and Levi-nissim, 1997), 이에 더해 발효 에탄올 추출물 의 안토시아닌 함량 증진을 확인하였다. HPLC chromatogram 에서 일부 피크에서 마찬가지로 일반 에탄올 추출물보다 발효 에탄올 추출물에서 증가하는 피크를 볼 수 있었으나 반대로 감소하는 피크의 물질 또한 존재함을 확인하였다. 발효를 실 시함으로서 안토시아닌의 함량 증가를 도모할 수 있으며, 항 염증 효능이 증진됨을 확인하였다. 상기와 같은 결과를 통하 여 발효한 아로니아 추출물은 염증에 대한 억제 기능이 증진 됨을 확인하여 아토피, 여드름 등 염증관련 피부민감성 질환 에 대한 제품의 소재로서 각광 받아 향장산업에 크게 기여할 수 있을 것으로 보인다.